邻位连接技术(pla)伯远生物邻位连接技术(pla)

邻位连接技术(pla)伯远生物邻位连接技术(pla)邻近连接技术PLA是一种高灵敏度、高特异性的蛋白质检测技术可在单分子水平原位分析蛋白质互作或翻译后修饰。其核心原理是当两个目标蛋白或修饰位点间距40 nm时偶联特异性抗体的PLUS/MINUS DNA探针会相互靠近经连接酶催化形成环状DNA模板再通过滚环扩增RCA添加荧光信号。该技术广泛应用于信号通路研究、疾病诊断等领域尤其适合FFPE组织样本和临床微量检测。公司简介我司是国家级专精特新小巨人企业国家级重点实验室牵头多项省部级重大专项公司科研技术人员500硕博占比40%以上作为功能基因研究综合性平台15年技术沉淀每年完成功能基因研究数量50000长期服务课题组10000含协和、同济、华西、湘雅、中山、军事医学院等顶尖医学研究机构各类仪器设备投资超1个亿案例展示我司案例细胞样本蛋白A和蛋白B强互作检测细胞样本蛋白A和蛋白B弱互作检测细胞样本蛋白A和蛋白B互作线粒体定位组织切片样本蛋白A和蛋白B互作检测参考文献Wang S, Yoo S H, Kim H, et al. Detection of in situ protein-protein complexes at the Drosophila larval neuromuscular junction using proximity ligation assay[J].Journal of visualized experiments: JoVE, 2015 (95): 52139.背景说明背景说明邻近连接技术Proximity Ligation AssayPLA是一种基于抗体识别与DNA扩增的高灵敏度蛋白质检测技术其核心原理是通过空间邻近依赖的DNA连接与扩增将蛋白质相互作用或翻译后修饰事件转化为可定量的荧光信号。具体原理可分为以下关键步骤1双抗体识别使用一对特异性抗体分别针对目标蛋白A和B或同一蛋白的不同修饰位点抗体分别偶联一条独特的单链DNA探针PLUS和MINUS探针。当两个靶标在空间上邻近 40 nm时其携带的DNA探针末端得以靠近2DNA连接与环化探针末端的互补序列在连接酶催化下共价结合形成闭环DNA模板。这一步骤具有高度特异性当两靶标真实互作时才会触发。3信号放大与检测闭环DNA通过滚环扩增RCA生成包含数百重复单元的DNA产物再与荧光标记或酶标探针杂交形成离散的荧光信号点每点代表单个互作事件。这种指数级信号放大使PLA可检测单分子水平的目标蛋白。